CHX是灰鏈霉菌的產(chǎn)物，常常用于檢測蛋白質(zhì)或酶的半衰期。CHX抑制細(xì)胞總蛋白合成的原理是阻斷真核細(xì)胞核糖體易位過程。用適當(dāng)濃度的CHX處理細(xì)胞（通常為100μg/mL）不同時間點，收集細(xì)胞樣品進行WB實驗檢測蛋白質(zhì)豐度。

半衰期短的蛋白質(zhì)會隨著時間的推移迅速降解，而半衰期長的蛋白質(zhì)隨著時間的推移，降解的很少。

CHX常用于檢測蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和半衰期。在下面這個案例中，用50μg/mL的CHX處理6h和12h，WB檢測蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)敲低AHI1加速了Tyk2的蛋白質(zhì)降解。

敲低AHI1加速了Tyk2的蛋白質(zhì)降解（Ying Miao et al. 2023. bio protocol）

還不知道檢測蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和半衰期方法的家人可以先看看往期文章：《蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、半衰期實驗的原理、方法和應(yīng)用》

MG132又稱芐氧羰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸，是一種多肽醛。MG132是大家熟知的蛋白酶體抑制劑，MG132的作用機制是通過與蛋白酶體20S催化核心的活性位點蘇氨酸殘基中的羥基半縮醛反應(yīng)，從而抑制蛋白酶體活性。

在下面這個案例中，使用MG132能夠抑制蛋白質(zhì)的泛素化降解，促進泛素化蛋白的積累，從而更容易檢測到蛋白質(zhì)的泛素化。如下圖的圖C所示：在不添加MG132時，即使Bmi-1和Ezh2能被泛素化，也可能會迅速降解，從而檢測不到信號，MG132處理抑制蛋白酶體，導(dǎo)致泛素化的蛋白積累，因此更容易檢測到泛素化的蛋白。

需要特別注意的是，如下圖A和B所示，在不添加MG132時，可能檢測不到ub信號。

需要泛素化質(zhì)粒的可以聯(lián)系小編。

MG132促進蛋白質(zhì)泛素化（Sivaprakasam B et al. 2012. J Biol Chem）

另外，CHX和MG132也能夠結(jié)合起來驗證蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和降解途徑。例如在下面這個案例中，左邊是MG132和CHX聯(lián)合處理，右邊是只用CHX處理，w/o MG132表示 without MG132。說明MG132增加了a-SMN蛋白的穩(wěn)定性，而MG132沒有增加FL-SMN的蛋白穩(wěn)定性。

MG132對a-SMN和FL-SMN蛋白半衰期的影響（Denise Locatelli et al. 2015. PLOS ONE）

大家可以根據(jù)自己的實驗?zāi)康撵`活選擇抑制劑單獨處理或聯(lián)合處理，從而更有利于發(fā)現(xiàn)問題所在，更好的分析結(jié)果。