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【腦聲常談】動(dòng)物實(shí)驗(yàn)云課堂:大小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)(staircase test,ST)測試方法總結(jié)

 腦聲常談 2023-11-14 發(fā)布于上海

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爬梯同樣是觀察動(dòng)物焦慮狀態(tài)的一種檢測手段,主要用于評價(jià)腦損傷后的感覺運(yùn)動(dòng)功能缺損。在小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)(staircase test,ST)中,小鼠站立是指小鼠出于警惕性,前爪騰空或(一只前爪或兩只前爪)扒靠在爬梯內(nèi)壁向上或向前嗅探,判斷是否有危險(xiǎn)的行為。小鼠爬梯次數(shù)可以判斷其運(yùn)動(dòng)活力,爬梯是指小鼠在爬梯實(shí)驗(yàn)過程中,四肢均爬上一級臺階的情況,爬下一級不做計(jì)算。小鼠的樓梯測試通過比較爬樓梯與站立的比率來區(qū)分運(yùn)動(dòng)反應(yīng)和抗焦慮反應(yīng)。因此,當(dāng)飼養(yǎng)的減少伴隨著爬升步數(shù)不變或增加時(shí),就可以解釋為焦慮癥。該測試顯示了抗焦慮藥的藥理學(xué)選擇性,事實(shí)上,運(yùn)動(dòng)興奮劑往往會(huì)降低測試中的兩個(gè)參數(shù)。樓梯測試測量獨(dú)立前肢伸展、感覺能力、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性和抓握技能。


儀器裝置


該裝置包括一個(gè)封閉的樓梯,有五個(gè)灰色塑料制成的臺階。每個(gè)臺階高2.5厘米,長7.5厘米,寬11厘米,因此樓梯在最上面的臺階處高達(dá)12.5厘米。該裝置長45厘米,并被一端高12.5厘米、另一端高25厘米的墻包圍。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將C57小鼠頭部朝向爬梯放置于最下層靠近內(nèi)壁中間的位置,測試開始前至少 1 小時(shí)將動(dòng)物從籠子里移至測試室。將小鼠放置在底層,背對樓梯。觀察3分鐘內(nèi)上升的步數(shù)和站立的次數(shù),開始計(jì)時(shí),記錄每只小鼠的站立及爬梯次數(shù)。在動(dòng)物之間用濕紙巾擦拭該裝置并干燥。樓梯測試是在限制籠子中重新配置側(cè)向伸手孔和管子的各種嘗試中出現(xiàn)的,以便小鼠只能在特定位置使用一個(gè)或另一個(gè)肢體。解決方案是在狹窄的走廊內(nèi)開發(fā)一個(gè)平臺,大鼠(或小鼠)可以沿著該平臺爬行,并從兩側(cè)伸手拾取食物顆粒。走廊太窄不允許鼠轉(zhuǎn)身,因此它只能使用左前爪從左側(cè)夠到顆粒,使用右前爪從右側(cè)夠到顆粒。具有一系列臺階的雙樓梯,每個(gè)臺階上有一個(gè)淺井,每個(gè)井中放置兩個(gè)食物顆粒,然后提供大鼠取回顆粒必須達(dá)到的一系列線性距離以及相應(yīng)的難度等級。在每次測試中,將輕度食物剝奪的大鼠放置在樓梯裝置中15分鐘,最后可以計(jì)算回收的顆粒數(shù)量。這種特定的測試還用于大鼠,并利用每側(cè)由兩個(gè)狹窄樓梯組成的室,鼓勵(lì)大鼠使用單個(gè)前肢到達(dá)、抓住和吃掉食物顆粒。樓梯的每一步都會(huì)增加到達(dá)的距離,從而增加任務(wù)的難度。


 指標(biāo)分析


通常記錄兩個(gè)測量值:取回的顆粒、移除的顆??倲?shù),它提供了動(dòng)物在本體感覺反饋下可以到達(dá)并協(xié)調(diào)有效抓握和取回的距離的指數(shù);

在該測試中,小鼠糞便和排尿點(diǎn)的數(shù)量很容易量化,并提供應(yīng)激反應(yīng)的進(jìn)一步指標(biāo);

最大到達(dá)距離,即剩余一個(gè)或更少顆粒的最遠(yuǎn)步驟,它提供了動(dòng)物可以嘗試到達(dá)的最大距離的指數(shù)。在實(shí)踐中,這兩個(gè)指數(shù)產(chǎn)生非常相似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,并且對于大多數(shù)目的,簡單地記錄回收的顆粒就提供了可靠且有效的指標(biāo)。

- 爬梯試驗(yàn)測試結(jié)果示例 -

樓梯到達(dá)任務(wù)是測量與PDHD模型嚙齒動(dòng)物相關(guān)的行為缺陷的極其敏感的方法。樓梯測試的優(yōu)點(diǎn)是快速測量雙側(cè)肢體損傷,并提供在一定范圍內(nèi)達(dá)到成功的客觀終點(diǎn)測量。此外還可以提供對熟練到達(dá)的運(yùn)動(dòng)要素及其生物測量的評估。大多數(shù)對PD模型大鼠的研究幾乎沒有發(fā)現(xiàn)任何改善,而一些使用HD模型大鼠的研究則發(fā)現(xiàn)了一些改善。這些結(jié)果與通過許多其他行為測量(例如姿勢、肢體使用不對稱性和旋轉(zhuǎn)行為)觀察到的更成功的功能恢復(fù)形成對比。爬梯測試將繼續(xù)成為檢測神經(jīng)移植積極效果的較好篩選方法。

樓梯測試通常被稱為熟練前肢使用的測試,盡管它也取決于大鼠學(xué)習(xí)新的復(fù)雜運(yùn)動(dòng)模式的能力。事實(shí)上,正常大鼠可能需要連續(xù)十天的測試才能在該測試中達(dá)到穩(wěn)定和最佳的表現(xiàn)。


優(yōu)點(diǎn)


  • 具有良好的動(dòng)態(tài)范圍,并且評估運(yùn)動(dòng)行為的生理類型,對動(dòng)物具有明顯的適應(yīng)價(jià)值。

  • 該測試的一個(gè)潛在缺點(diǎn)在于其復(fù)雜性。該測試的表現(xiàn)不僅取決于動(dòng)物的精細(xì)運(yùn)動(dòng)技能,還取決于學(xué)習(xí)和動(dòng)機(jī)成分。


注意事項(xiàng)


早期的研究應(yīng)對動(dòng)物在術(shù)前進(jìn)行訓(xùn)練,在實(shí)驗(yàn)操作之前進(jìn)行2-4周的訓(xùn)練以獲得穩(wěn)定的基線

實(shí)驗(yàn)期間保持安靜,光線無變化,室溫保持在20~25℃,提前清潔及干燥透明爬梯,消除多余氣味。


文獻(xiàn)引用


Cryan et al. 2003;

Simiand et al. 1984

Cryan et al.2003

Gray and Lalljee 1974

Simiand et al. 1984

Cryan JF.2007

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