為了實(shí)現(xiàn)目的基因在特定的組織中高效表達(dá)，需要前期做好實(shí)驗(yàn)規(guī)劃。其中最為關(guān)鍵的是需要選擇合適的血清型和啟動(dòng)子。由于rAAV的吸附，入侵，胞內(nèi)運(yùn)輸，蛋白酶體降解，入核，脫衣殼等步驟都與衣殼蛋白相關(guān)，因此血清型的結(jié)構(gòu)決定rAAV的侵染效率和靶向特異性等基本能力。我們可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的血清型。下表是由小編整理的常見(jiàn)血清型的組織靶向性總結(jié)，供大家參考。

特異性啟動(dòng)子能使目的基因在特定的組織和細(xì)胞類型中表達(dá)，因此我們可以選用特異性啟動(dòng)子，進(jìn)一步提高目的基因遞送的特異性?？梢赃x用一些被改造的特異性啟動(dòng)子，如融合了增強(qiáng)子序列的特異性啟動(dòng)子，這些特異性啟動(dòng)子往往在保證組織特異性的同時(shí)也具備較高的啟動(dòng)活性。同時(shí)盡量選用較短長(zhǎng)度的啟動(dòng)子，以此擴(kuò)大目的基因的裝載容量。下表是由小編整理的常見(jiàn)特異性啟動(dòng)子及其靶向性總結(jié)，供大家參考。

二、專業(yè)的實(shí)驗(yàn)操作對(duì)注射效果有重要影響

選擇合適和血清型和設(shè)計(jì)合適的載體只是實(shí)驗(yàn)成功的基本前提，而注射方式、注射劑量和實(shí)驗(yàn)操作等，這些因素也對(duì)我們實(shí)驗(yàn)的成敗有著重要的影響。

在注射方式上，分為系統(tǒng)性注射和局部注射。系統(tǒng)性注射又包括尾靜脈注射、腹腔靜脈注射、眼眶靜脈注射和頸靜脈等。局部注射方式常見(jiàn)的包括腦立體定位注射、肌肉定點(diǎn)注射、心肌原位注射、玻璃體腔內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔注射等。系統(tǒng)性注射操作簡(jiǎn)單，但由于需要依賴病毒在體內(nèi)隨機(jī)擴(kuò)散到達(dá)靶組織，因此其病毒用量較大。局部注射所需的病毒量較少，一般100ul以內(nèi)，但對(duì)滴度要求較高。由于是直接將rAAV注射到目標(biāo)組織中，因而局部注射會(huì)有更好的靶向性。我們可以根據(jù)實(shí)際的需求來(lái)選擇合適的注射方式，下表是小編整理的針對(duì)常見(jiàn)注射部位的有效注射方法，供大家參考。

在實(shí)際操作過(guò)程中，我們需要詳細(xì)了解操作步驟和注意細(xì)節(jié)。特別是一些具有難度的局部注射的方法，這些方法往往涉及開(kāi)腹、尋找微組織等操作，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作手法要求較高，稍有失誤，小鼠便會(huì)有較大的損傷，最終影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面給大家介紹幾個(gè)注射方式的難點(diǎn)及注意細(xì)節(jié)。

圖1. 乳鼠顳靜脈注射

圖2. 腦立體定位注射

尾靜脈注射失敗易導(dǎo)致病毒在尾部殘留，影響整體病毒注射量和成像結(jié)果（如圖3第4只小鼠）。

圖3. 尾靜脈注射

三、結(jié)語(yǔ)

一次成功的rAAV體內(nèi)的基因操作實(shí)驗(yàn)，需要考慮多方面的因素。前期需要查閱大量的資料選擇血清型和啟動(dòng)子，設(shè)計(jì)合理科學(xué)的方案，并生產(chǎn)出高滴度高感染效率的rAAV。此外擁有熟練的實(shí)驗(yàn)操作技能和專業(yè)素養(yǎng)，才能有效地將rAAV遞送至體內(nèi)，從而有效實(shí)現(xiàn)目的片段的表達(dá)。