1. 因?qū)嶒?yàn)需保證待檢測(cè)樣品細(xì)胞為單細(xì)胞懸液，因此在細(xì)胞培養(yǎng)、制備階段，貼壁細(xì)胞需用先用胰酶消化成單個(gè)細(xì)胞，而后再后收集待測(cè)樣品細(xì)胞；胸腺、脾臟和淋巴結(jié)等外周免疫器官，主要由免疫細(xì)胞組成，只需直接將臟器經(jīng)鋼網(wǎng)研磨即可制成單細(xì)胞懸液；實(shí)體臟器肺臟、肝臟和腫瘤組織內(nèi)含有較多的結(jié)締組織，而實(shí)體臟器細(xì)胞之間一般結(jié)合緊密，所以直接簡(jiǎn)單的將臟器進(jìn)行研磨是無(wú)法得到理想的單細(xì)胞懸液的，因此，研磨前需將臟器剪碎后加入IV型膠原酶和DNA核酸內(nèi)切酶消化，而后再將消化后的組織用研磨棒直接研磨，從而得到理想的單細(xì)胞懸液（實(shí)體臟器研磨后的單細(xì)胞懸液以實(shí)體細(xì)胞為主，如果研究目標(biāo)不是實(shí)體細(xì)胞，而是臟器內(nèi)浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞，可以用Percoll密度梯度離心法富集免疫細(xì)胞）。而后對(duì)收集到的理想的單細(xì)胞懸液進(jìn)行離心、洗滌、封閉、標(biāo)記熒光素偶聯(lián)抗體后，即可進(jìn)行流式分析。

2. 調(diào)節(jié)電壓時(shí)，如果檢測(cè)的目標(biāo)細(xì)胞體積較小，可以適當(dāng)提高電壓值，使目標(biāo)細(xì)胞與細(xì)胞碎片在流式圖中能夠完全分離；如果檢測(cè)的目標(biāo)細(xì)胞體積較大，可以適當(dāng)降低電壓值，使所有的目標(biāo)細(xì)胞群完整顯示于流式圖中，防止細(xì)胞群接近于流式圖的邊界而變形扭曲或者完全處于邊界外。

3. 關(guān)于樣本的封閉，并不是標(biāo)記熒光素偶聯(lián)抗體之前必須封閉樣品，一般樣品細(xì)胞與流式抗體的種屬來(lái)源是不同的，如標(biāo)記人的細(xì)胞的熒光素偶聯(lián)抗體一般來(lái)源于小鼠，人細(xì)胞的FcR也不一定能夠與小鼠來(lái)源的熒光素偶聯(lián)抗體的Fc段結(jié)合，但是，也有可能因?yàn)榉N屬關(guān)系較近，或者在一定環(huán)境條件下這種不同種屬間的Fc段和FcR也能結(jié)合，實(shí)驗(yàn)者很難判斷實(shí)驗(yàn)過(guò)程中這種結(jié)合是否會(huì)發(fā)生，但是在標(biāo)記熒光素偶聯(lián)抗體前封閉樣品卻可以保證這種非特異性結(jié)合一定不會(huì)發(fā)生。所以，當(dāng)條件允許時(shí)，實(shí)驗(yàn)者最好選擇對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品進(jìn)行封閉處理。