背景^[1-3]

正常驢血清是從未免疫的正常成年驢體內(nèi)采集的血液加工而成，可應(yīng)用于大多數(shù)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，用作封閉液或空白對照。正常血清是用來描述來自沒有用特異抗原進(jìn)行免疫產(chǎn)生抗體的動物的血清。因此，正常血清與抗血清相對。

正常血清包含血清蛋白的一般補(bǔ)體，包括存在于特定物種健康動物體內(nèi)的不同種類的免疫球蛋白。提供的正常血清產(chǎn)品經(jīng)過脂類抽提以提高透明度，經(jīng)去鹽和透析處理以去除包含疊氮化鈉的磷酸緩沖液，并最后凍干以獲得凍干粉末。

正常血清非常適用于作為封閉試劑去除非特異性雜交。正常血清在檢測一般或特異抗體純化方法的時(shí)候也經(jīng)常作為對照使用。

正常驢血清，來源于非免疫的驢宿主，經(jīng)過脂質(zhì)萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。最佳的稀釋比例需研究者通過實(shí)驗(yàn)來確定。建議的起始稀釋比例如下：IHC-p（1：10-20），IF/ICC（1：10-20）和ELISA（1：100）。

推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。

注意：封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。

應(yīng)用^[4][5]

用于驢血清PMSG免疫學(xué)早期妊娠診斷方法的研究

通過孕馬血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG）免疫檢測條件、配種后PMSG最佳檢出時(shí)期和PMSG血清免疫學(xué)檢測符合率驗(yàn)證三部分內(nèi)容,建立了成熟的PMSG檢測方法,為驢早期妊娠檢測紙條的制備奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:建立PMSG免疫學(xué)檢測方法。

通過SDS-PAGE檢測了PMSG抗原的純度,Dot blot方法驗(yàn)證了能夠與PMSG結(jié)合的抗體,采用Western Blot驗(yàn)證了PMSG與抗體以空間表位方式結(jié)合,并進(jìn)一步通過ELISA方法建立PMSG濃度與吸光度值的酶標(biāo)曲線,擬合方程為y=0.0045x+0.0202,R2=0.998;母驢妊娠后PMSG分泌規(guī)律。

采集配種后第2、3、4、5、6、7和8周的母驢血清,使用ELISA酶聯(lián)免疫方法測定血清PMSG含量。從第5周開始,可檢測到血清PMSG,且含量逐步增加,50 d達(dá)到峰值80 IU·mL-1,后續(xù)開始下降;臨床驗(yàn)證。挑選15頭配種母驢,并且直腸檢查孕驢15頭,利用本試驗(yàn)建立起來的血清免疫學(xué)檢測方法檢測配種5周后母驢血清,發(fā)現(xiàn)孕驢7頭,未妊娠驢8頭,孕驢陽性臨床符合率為46.7%,檢測配種6周后母驢血清,發(fā)現(xiàn)孕驢14頭,未妊娠驢1頭,孕驢陽性臨床符合率為93.3%。

檢測配種7周后母驢血清,發(fā)現(xiàn)孕驢15頭,未妊娠驢0頭,孕驢陽性臨床符合率為100%?？諔涯阁H陰性對照15頭,血清免疫學(xué)檢測方法檢測為15頭,陰性臨床符合率為100%。綜上,通過血清PMSG酶聯(lián)免疫檢測早期妊娠母驢的檢測時(shí)期為配種5周后,最佳檢測時(shí)期為配種后6或7周。

參考文獻(xiàn)

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