1 2008 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2011 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2015 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;⒘姿峄?、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2013 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;⒘姿峄⒎核鼗纫种苹蚣せ罨虮磉_[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2000 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2007 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 7 2011 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙?;?、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C9'>由于檢測方法的局限,m6A的研究長時間沒有取得重大進步.高效液相色譜三重四級桿質譜聯用技術(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測其動態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... [8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... id='C23'>目前發(fā)現的m6A的去甲基酶只有哺乳動物細胞的FTO[8]及ALKBH5[31].它們同屬于二價鐵和α-酮戊二酸依賴的雙加氧酶AlkB家族,人體中發(fā)現有9個AlkB家族蛋白,包括ALKBH1-8和FTO.降低FTO在細胞內的表達量會引起RNA上m6A水平的升高.FTO主要定位在細胞核中.ALKBH5與RNA的相互作用力比FTO強,因為直接用免疫共沉淀的方法就發(fā)現了其作用的RNA底物.此外在小鼠的睪丸中ALKBH5有很高的表達量,敲除ALKBH5的小鼠精子發(fā)育出現異常. ... ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 1 2010 ... id='C3'>中心法則提出,遺傳信息從DNA轉錄為RNA,再從RNA翻譯為具有不同功能的蛋白質.表觀遺傳學指出,基因表達的每個環(huán)節(jié)都是被嚴密調控的,相同的核苷酸序列,可表達出可遺傳的不同遺傳信息,其中以DNA甲基化和組蛋白翻譯后修飾為代表.如DNA甲基化修飾5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)[1, 2],它存在于基因的啟動子區(qū)時,會抑制基因的轉錄,進一步影響細胞的分化生長.DNA上的5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)有促進基因表達的功能,它在白血病細胞中含量升高[3, 4].組蛋白也可以通過甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等抑制或激活基因表達[5-7].由于RNA結構的復雜、性質的不穩(wěn)定及研究方法的限制等,人們一直忽略了RNA在表觀遺傳學中的重要作用,直到2011年發(fā)現首個RNA化學修飾N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)的去甲基酶[8],才發(fā)現RNA的轉錄后修飾也是表觀遺傳學的重要環(huán)節(jié)[9]. ... 1 2011 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 2 1990 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1988 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 3 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... [13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1976 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 1 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 1 1975 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 2 1977 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1978 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 2 1980 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... 2 1981 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... 2 2002 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 2 1969 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1968 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... 2 1987 ... id='C4'>RNA上已鑒定出的100多種化學修飾中[10],m6A是真核生物mRNA上存在的最為保守、廣泛的中間修飾(0.1%-0.4% m6A/A),相當于平均每條mRNA含有3-5個m6A [11-13].自20世紀70年代被發(fā)現以來,它在病毒[14, 15]、哺乳動物細胞[13, 16-19]、果蠅[20]、植物[21, 22]以及酵母[23]中都陸續(xù)被鑒定出來.按RNA的種類分類,m6A還發(fā)現于tRNA[24]、rRNA[25]、小核RNA (small nuclear RNA,snRNA)[26]以及長非編碼RNA (long non-coding RNA,lncRNA)中.由于m6A不會干擾堿基互補配對,在反轉錄時不會產生突變,致使其檢測比較困難,長久以來研究比較緩慢.直到第一個RNA去甲基酶肥胖蛋白FTO (fat-mass and obesity associated protein)的發(fā)現,揭示m6A是動態(tài)可逆的,預示著具有調控基因表達的潛在功能[8].自此開啟了全新研究領域——RNA表觀遺傳學(亦稱表觀轉錄組學). ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 3 1997 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動物細胞中研究發(fā)現,METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個十分穩(wěn)定的異源二聚體,METTL3作為催化中心,METTL4主要結合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關的蛋白,對METTL3-METTL14復合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點的定位有重要作用,敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現,KIAA1429也是甲基化轉移酶復合物的重要成分[55],但是具體功能還未有詳細報道. ... 1 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... 1 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... 2 2014 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 6 2013 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測方法的局限,m6A的研究長時間沒有取得重大進步.高效液相色譜三重四級桿質譜聯用技術(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測其動態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... , 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... id='C23'>目前發(fā)現的m6A的去甲基酶只有哺乳動物細胞的FTO[8]及ALKBH5[31].它們同屬于二價鐵和α-酮戊二酸依賴的雙加氧酶AlkB家族,人體中發(fā)現有9個AlkB家族蛋白,包括ALKBH1-8和FTO.降低FTO在細胞內的表達量會引起RNA上m6A水平的升高.FTO主要定位在細胞核中.ALKBH5與RNA的相互作用力比FTO強,因為直接用免疫共沉淀的方法就發(fā)現了其作用的RNA底物.此外在小鼠的睪丸中ALKBH5有很高的表達量,敲除ALKBH5的小鼠精子發(fā)育出現異常. ... ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 5 2012 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測方法的局限,m6A的研究長時間沒有取得重大進步.高效液相色譜三重四級桿質譜聯用技術(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測其動態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... id='C10'>2012年,兩個課題組[32, 33]分別同時開發(fā)了m6A的高通量測序技術(m6A-seq或MeRIP),極大推動了m6A的研究.該技術是將mRNA切成100個核苷酸(100 nt)左右的片段,采用m6A抗體親和富集沉淀的方法,將富集出來的攜帶有m6A的RNA片段和對照(input)分別建庫,可以得到分辨率在200 nt左右的全轉錄組m6A分布圖.研究發(fā)現,在人和老鼠中,轉錄組m6A分布在mRNA和non-coding RNA (ncRNA),主要富集在3′非翻譯區(qū)(3′UTR),其次是長的外顯子(exon)上.m6A也在內含子(intron)上出現,說明m6A是在剪接前或剪接時被加到轉錄本上.從人類到老鼠細胞,從正常細胞到癌癥細胞,到受外界各種刺激的細胞,測序結果顯示很多m6A位點都是保守的,但也有很多m6A位點是物種特異、細胞系特異,以及細胞受到外界脅迫會出現特異的m6A位點. ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動物細胞中的含量水平相當[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個品種轉錄組RNA上m6A的高通量測序[43]結果顯示,與哺乳動物細胞相比,m6A在mRNA上的分布具有特異性,m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR,還集中在起始密碼子(start codon)附近,意味著m6A可能在植物中存在獨特的功能.此外,研究發(fā)現在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關蛋白基因,并且一些光合作用相關的基因mRNA上也含有m6A,這說明m6A也與光合作用相關.在植物中m6A的保守序列與哺乳動物相同,都是RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達量負相關,而在5′端的m6A與基因表達正相關.植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進一步探索. ... 6 2012 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... ... , 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... ... id='C9'>由于檢測方法的局限,m6A的研究長時間沒有取得重大進步.高效液相色譜三重四級桿質譜聯用技術(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測其動態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... [33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... id='C10'>2012年,兩個課題組[32, 33]分別同時開發(fā)了m6A的高通量測序技術(m6A-seq或MeRIP),極大推動了m6A的研究.該技術是將mRNA切成100個核苷酸(100 nt)左右的片段,采用m6A抗體親和富集沉淀的方法,將富集出來的攜帶有m6A的RNA片段和對照(input)分別建庫,可以得到分辨率在200 nt左右的全轉錄組m6A分布圖.研究發(fā)現,在人和老鼠中,轉錄組m6A分布在mRNA和non-coding RNA (ncRNA),主要富集在3′非翻譯區(qū)(3′UTR),其次是長的外顯子(exon)上.m6A也在內含子(intron)上出現,說明m6A是在剪接前或剪接時被加到轉錄本上.從人類到老鼠細胞,從正常細胞到癌癥細胞,到受外界各種刺激的細胞,測序結果顯示很多m6A位點都是保守的,但也有很多m6A位點是物種特異、細胞系特異,以及細胞受到外界脅迫會出現特異的m6A位點. ... 1 1979 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... 7 2008 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動物細胞中的含量水平相當[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個品種轉錄組RNA上m6A的高通量測序[43]結果顯示,與哺乳動物細胞相比,m6A在mRNA上的分布具有特異性,m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR,還集中在起始密碼子(start codon)附近,意味著m6A可能在植物中存在獨特的功能.此外,研究發(fā)現在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關蛋白基因,并且一些光合作用相關的基因mRNA上也含有m6A,這說明m6A也與光合作用相關.在植物中m6A的保守序列與哺乳動物相同,都是RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達量負相關,而在5′端的m6A與基因表達正相關.植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進一步探索. ... ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... ... [35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... ... id='C20'>植物中m6A相關的蛋白酶研究較少,只在擬南芥中研究了它的甲基化轉移酶組分MTA (At4g10760,METTL3同源蛋白)和FIP37(At3g54170,WTAP同源蛋白)(圖1).擬南芥MTA最早被命名為EMB1706(Embryo-Defective1706),是在篩選胚胎發(fā)育損傷的基因時發(fā)現并命名.MTA主要分布在分裂組織中,特別是生殖器官,頂端分生組織及新生的根毛等,相應的m6A在這些組織中含量較高,花苞中含量最高.在擬南芥中敲除MTA會使種子停留在球形胚階段不能繼續(xù)發(fā)育[35].在mta突變體中部分回補胚發(fā)育期的特定啟動子ABI3啟動的MTA,可以使mta突變體種子度過胚胎發(fā)育初期繼續(xù)發(fā)育,而進入之后的成長階段后不再表達MTA,使擬南芥植株的m6A水平下降.可以看到m6A水平的下降會導致擬南芥頂端優(yōu)勢的降低,花序節(jié)間長度變短,蓮座葉變得更小但是更濃密.毛狀體分叉數目增多,而毛狀體分叉是植物核內復制的指示標,說明m6A可能與調控DNA的復制相關. ... ... id='C21'>FIP37與MTA有相互作用[35-37].FIP37也表達在活躍分裂的組織中,如頂端分生組織、幼嫩的葉、成長的花器官等.FIP37的缺失導致轉錄組在靠近終止密碼子的位置及3′UTR區(qū)域的m6A發(fā)生缺失,5′UTR及蛋白編碼區(qū)的影響較小.FIP37的缺失還會使擬南芥頂端分生組織過度分化.FIP37與動物當中的WTAP的功能有所區(qū)別.WTAP定位在核斑點中,影響mRNA的剪接,而FIP37均勻地分布在除核仁以外的核質中,沒有發(fā)現其影響RNA的剪接. ... ... id='C39'>m6A在細胞應對各種外界刺激時發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會改變YTHDF2在細胞中的定位,由細胞質轉移到細胞核,保護特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化,從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會導致跟刺激相關的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會響應各種刺激,表達水平上升[72].所以可以看出,m6A在細胞應對外界刺激時,發(fā)揮不可忽視的作用. ... 3 2016 ... id='C5'>mRNA上攜帶著編輯蛋白序列的密碼子,m6A像密碼子之上多出的旁注,要解析m6A所攜帶的信息,需要開發(fā)m6A的檢測技術,發(fā)現和研究m6A甲基轉移酶復合物(編碼器)、去甲基酶(消碼器)和結合蛋白(讀碼器)的功能.目前,人們已經在哺乳動物細胞中找到m6A甲基轉移酶復合物的四個組分METTL3(methyltransferase like 3)[27]、METTL14(methyltransferase like 14)[28]、WTAP (wilms′ tumor1-associating protein)[29]和KIAA1429[30],兩個去甲基酶FTO[8]和ALKBH5[31],和一系列結合蛋白,并發(fā)展了利用抗體富集的m6A高通量測序技術[32, 33].在植物中,m6A同樣被很早發(fā)現,1979年Kennedy和Lane[34]在小麥中發(fā)現了m6A,1980年Haugland和Cline[21]發(fā)現在燕麥胚芽鞘mRNA內部存在m6A,1981年Nichols和Welder[22]在玉米中發(fā)現m6A.但是m6A在植物中的研究還比較滯后,主要還停留在對m6A甲基轉移酶的研究階段[35-37]. ... ... id='C21'>FIP37與MTA有相互作用[35-37].FIP37也表達在活躍分裂的組織中,如頂端分生組織、幼嫩的葉、成長的花器官等.FIP37的缺失導致轉錄組在靠近終止密碼子的位置及3′UTR區(qū)域的m6A發(fā)生缺失,5′UTR及蛋白編碼區(qū)的影響較小.FIP37的缺失還會使擬南芥頂端分生組織過度分化.FIP37與動物當中的WTAP的功能有所區(qū)別.WTAP定位在核斑點中,影響mRNA的剪接,而FIP37均勻地分布在除核仁以外的核質中,沒有發(fā)現其影響RNA的剪接. ... ... id='C39'>m6A在細胞應對各種外界刺激時發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會改變YTHDF2在細胞中的定位,由細胞質轉移到細胞核,保護特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化,從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會導致跟刺激相關的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會響應各種刺激,表達水平上升[72].所以可以看出,m6A在細胞應對外界刺激時,發(fā)揮不可忽視的作用. ... 1 1976 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1979 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 2 1985 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... ... , 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1995 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 1 1977 ... id='C8'>早期在RNA中鑒定m6A的方法采用同位素標記[13, 38, 39]、薄層色譜[40, 41]等方法,研究發(fā)現m6A出現在特定的序列GAC (70%)或AAC (30%)中[19, 42],并且這個保守序列是mRNA上m6A特有的,并沒有出現在rRNA、tRNA和snRNA[24-26]中.之后m6A保守序列被進一步拓展成RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U)[11, 32, 33, 40],后來的全轉錄組m6A高通量測序結果也證實了這一保守序列[31, 33].m6A甲基轉移酶和結合蛋白也都傾向于識別這個序列.但是由于這個保守序列的數量遠大于m6A的數量,所以m6A的形成并不是m6A甲基轉移酶簡單地識別這個保守序列,應該存在更復雜的機理指導m6A的生成. ... 3 2014 ... id='C9'>由于檢測方法的局限,m6A的研究長時間沒有取得重大進步.高效液相色譜三重四級桿質譜聯用技術(HPLC-LC/MS/MS)可以更加精確地定量m6A并監(jiān)測其動態(tài)變化[8, 31].m6A抗體免疫印跡方法(dotblot)[8, 31, 33]也可以更方便靈敏地檢測出m6A的含量.m6A廣泛分布在各種組織中,尤其富集在大腦、肝臟、腎臟中,并且在大腦的發(fā)育中,m6A的含量逐漸升高[33].m6A在各種癌細胞系中含量也不同[32].在不同的擬南芥株系中,mRNA上m6A含量也是動態(tài)變化的[43].這些m6A的動態(tài)變化也說明m6A發(fā)揮著重要的調控功能. ... ... id='C12'>擬南芥上的m6A與動物細胞中的含量水平相當[32, 35, 43].2014年擬南芥Can-0和Hen-16兩個品種轉錄組RNA上m6A的高通量測序[43]結果顯示,與哺乳動物細胞相比,m6A在mRNA上的分布具有特異性,m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR,還集中在起始密碼子(start codon)附近,意味著m6A可能在植物中存在獨特的功能.此外,研究發(fā)現在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關蛋白基因,并且一些光合作用相關的基因mRNA上也含有m6A,這說明m6A也與光合作用相關.在植物中m6A的保守序列與哺乳動物相同,都是RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達量負相關,而在5′端的m6A與基因表達正相關.植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進一步探索. ... ... [43]結果顯示,與哺乳動物細胞相比,m6A在mRNA上的分布具有特異性,m6A不僅集中在終止密碼子及3′UTR,還集中在起始密碼子(start codon)附近,意味著m6A可能在植物中存在獨特的功能.此外,研究發(fā)現在起始密碼子附近含有m6A的基因很多都是葉綠體相關蛋白基因,并且一些光合作用相關的基因mRNA上也含有m6A,這說明m6A也與光合作用相關.在植物中m6A的保守序列與哺乳動物相同,都是RRACH (R=G/A,G > A;H=A、C、U).擬南芥中位于3′UTR區(qū)的m6A傾向于與基因表達量負相關,而在5′端的m6A與基因表達正相關.植物上mRNA的起始密碼子附近的m6A功能需要我們進一步探索. ... 2 2013 ... id='C11'>酵母只在減數分裂期才會出現m6A,說明m6A對于酵母的減數分裂十分重要.2013年酵母中進行了分辨率更高(約50 nt)的m6A高通量測序[44].并且用敲除IME4甲基化轉移酶的酵母作為負對照,得到更加確信的結果.測序結果發(fā)現m6A在酵母中與人和老鼠模式相同,主要富集在3′UTR區(qū).在酵母中計算甲基化的轉錄本得到的保守序列中心也是GAC. ... ... id='C31'>釀酒酵母中確認的Mrb1也是YTH結構域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營養(yǎng)生長的器官里通過抑制減數分裂相關的基因來阻止酵母的生殖生長[71].人們很早就觀察到了這個現象,但不知具體機理.現在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知,Mmi1有可能是通過結合m6A發(fā)揮作用的. ... 1 2014 ... id='C13'>2014年水稻中mRNA上m6A的測序也被報道[45].研究也發(fā)現m6A不僅集中在翻譯終止點附近,也集中在翻譯起始位點.水稻的愈傷組織和葉片相比,m6A大部分的位點比較保守,但仍有相當一部分呈現組織特異性. ... 1 2015 ... id='C14'>為了追求更高的分辨率,2014年開發(fā)了光交聯輔助m6A測序技術(photo-crosslinking-assisted m6Asequencing strategy,PA-m6A-seq)[46],在細胞培養(yǎng)時摻加4-硫代尿苷(4-thiouridine,4SU),365 nm紫外光照下帶有4SU的RNA可以與m6A抗體發(fā)生交聯,從而在m6A位點附近引入突變,將m6A的位置定位到單堿基水平.但是該方法須引入4SU,目前只能在細胞中使用. ... 1 2015 ... id='C15'>2015年發(fā)展了m6A堿基分辨率交聯共沉淀技術(m6A individual-nucleotide-resolution cross-linkingand immunoprecipitation,miCLIP)[47],用254 nm波長紫外光誘導m6A抗體與RNA交聯,逆轉錄時會產生轉錄停止或突變,從而確定m6A精確位點.但是這種方法抗體的依賴性高,不同質量的抗體會得到不同的效率. ... 1 1994 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 1 1992 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 1 2011 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 1 2002 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... 2 2014 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動物細胞中研究發(fā)現,METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個十分穩(wěn)定的異源二聚體,METTL3作為催化中心,METTL4主要結合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關的蛋白,對METTL3-METTL14復合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點的定位有重要作用,敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現,KIAA1429也是甲基化轉移酶復合物的重要成分[55],但是具體功能還未有詳細報道. ... 2 2014 ... id='C17'>早在1988年Narayan和Rottman[12]就利用HeLa細胞核裂解液中包含的甲基化轉移酶體外對腺嘌呤進行甲基化的實驗.1994年人們分離出來與m6A甲基化相關的30、200和875 kDa復合物[48],1997年從200 kDa甲基化酶復合物中鑒定出70 kDa的第一個哺乳動物甲基化酶METTL3[27].序列分析發(fā)現它與已知的酵母中的調節(jié)減數分裂和孢子形成的IME4基因是同源蛋白[49],并通過實驗證實確為m6A甲基轉移酶組分[23].此外先后在多個物種中找到METTL3的同源蛋白,如擬南芥中的MTA[35],果蠅中的IME4[50],均發(fā)現m6A甲基化對生物體生長發(fā)育具有重要的調控功能.對METTL3家族進行進化分析[51]和實驗[52]發(fā)現了m6A甲基轉移酶復合物第二個活性組分,它是與METTL3不同家系但高度同源的METTL14基因.2008年擬南芥中發(fā)現MTA時,通過酵母雙雜交發(fā)現它與FIP37有相互作用[35].2014年證明FIP37在哺乳動物細胞中的同源蛋白WTAP[53]是m6A甲基化轉移酶復合物中第三個組分.人們又通過WTAP發(fā)現了能與其相互作用的KIAA1429為第四個組分[30]. ... ... id='C18'>在哺乳動物細胞中研究發(fā)現,METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個十分穩(wěn)定的異源二聚體,METTL3作為催化中心,METTL4主要結合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關的蛋白,對METTL3-METTL14復合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點的定位有重要作用,敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現,KIAA1429也是甲基化轉移酶復合物的重要成分[55],但是具體功能還未有詳細報道. ... 1 2016 ... id='C18'>在哺乳動物細胞中研究發(fā)現,METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個十分穩(wěn)定的異源二聚體,METTL3作為催化中心,METTL4主要結合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關的蛋白,對METTL3-METTL14復合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點的定位有重要作用,敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現,KIAA1429也是甲基化轉移酶復合物的重要成分[55],但是具體功能還未有詳細報道. ... 1 2014 ... id='C18'>在哺乳動物細胞中研究發(fā)現,METTL3[27]和METTL14[52]能形成一個十分穩(wěn)定的異源二聚體,METTL3作為催化中心,METTL4主要結合RNA底物[54].分別敲除METTL3和METTL14都能引起mRNA上的m6A顯著降低.WTAP是和mRNA的剪接有關的蛋白,對METTL3-METTL14復合物在富集著pre-mRNA剪接因子的核小斑點的定位有重要作用,敲除WTAP同樣能引起mRNA上m6A的顯著降低[53].近來發(fā)現,KIAA1429也是甲基化轉移酶復合物的重要成分[55],但是具體功能還未有詳細報道. ... 1 2012 ... id='C19'>在酵母中,甲基化轉移酶復合物是MIS復合物,定位在核仁中[56],由Ime4(METTL3同源蛋白),Mum2(WTAP同源蛋白),Slz1(sporulation specific with a leucine zipper motif protein 1)和其他未知蛋白成分組成.Mum2、Slz1是酵母中跟減數分裂有關的兩個蛋白,他們與Ime4都有相互作用.敲除Mum2會顯著影響Ime4的甲基化能力,但敲除Slz1并沒有直接影響Ime4的甲基化能力.哺乳動物和植物細胞內沒有Slz1的同源蛋白,它們的甲基化轉移酶主要定位在核小斑而不是核仁中. ... 1 2012 ... id='C24'>擬南芥中沒有FTO的同源蛋白,但是有13個AlkB家族同源蛋白[57].可以用ALKBH5與這13個潛在的去甲基酶作序列對比,預測擬南芥中RNA的去甲基酶(圖2). ... 2 2000 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... ... [58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 1 2006 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 1 2013 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 1 2016 ... id='C25'>植物中m6A的去甲基酶的鑒定還是十分重要的,它將直接證明m6A在植物中也是動態(tài)可逆發(fā)揮重要的調控功能的.但是由于植物中AlkB家族同源蛋白較多,目前相關研究很少.而且AlkB家族蛋白的功能十分廣泛,有可能識別單鏈或雙鏈DNA[58, 59]、單鏈RNA[8, 31]或雙鏈RNA,也有可能作為蛋白上的去甲基酶[60],還有可能是其他甲基化修飾的去甲基酶[58, 61].所以想要發(fā)現和鑒定出mRNA上m6A去甲基酶需要大量細致的工作.目前我們已經發(fā)現了擬南芥中的m6A的一個去甲基酶,可以調控擬南芥的開花時間(數據尚未發(fā)表). ... 2 2014 ... id='C27'>目前人們發(fā)現的m6A的結合蛋白主要是哺乳動物細胞中YTH結構域家族蛋白[62-64].YTH結構域家族蛋白是真核細胞中一個非常保守的蛋白家族,生物信息學分析發(fā)現在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白,植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C28'>第一個證明的m6A的結合蛋白是人類基因YTHDF2[62],它是一個細胞質定位的蛋白.YTHDF2在細胞中有超過3000個含m6A的目標RNA,其中大多是mRNA,小部分為非編碼RNA.YTHDF2對RNA的識別區(qū)域也呈現出一個保守的共有序列G (m6A) C.YHTDF2蛋白含有兩個功能域,C端含YTH結構域直接結合m6A,N端可以使mRNA重新定位到P小體,促進其降解. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細胞核內m6A結合蛋白,并且對m6A的結合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導m6A調控mRNA的剪接[63, 66],YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進其與mRNA的結合,同時抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結合,使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結合蛋白RBM15和RBM15B招募甲基化酶復合物進行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進XIST介導的X染色體基因轉錄本沉默通路[69]. ... 2 2015 ... id='C27'>目前人們發(fā)現的m6A的結合蛋白主要是哺乳動物細胞中YTH結構域家族蛋白[62-64].YTH結構域家族蛋白是真核細胞中一個非常保守的蛋白家族,生物信息學分析發(fā)現在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白,植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C29'>YTHDF1與YTHDF2不同,它的功能是促進mRNA的翻譯[64].YTHDF1也定位在細胞質中,與翻譯起始因子EIF3互相作用促進翻譯效率.YTHDF1表達量的降低,會使其底物mRNA與多聚核糖體的結合減弱,導致蛋白被翻譯的效率降低. ... 2 2014 ... id='C27'>目前人們發(fā)現的m6A的結合蛋白主要是哺乳動物細胞中YTH結構域家族蛋白[62-64].YTH結構域家族蛋白是真核細胞中一個非常保守的蛋白家族,生物信息學分析發(fā)現在人類、小鼠、果蠅、酵母、擬南芥、水稻中都存在YTH家族蛋白,植物中尤為豐富[65]. ... ... id='C32'>對其他YTH結構域蛋白,及其他新的m6A的結合蛋白的研究將是理解m6A如何發(fā)揮功能的關鍵.YTH結構域蛋白在植物中尤其豐富,擬南芥中就有13個成員(圖3),分別為ECT1-12和CPSF30[65]. ... 1 2015 ... id='C30'>YTHDC1是細胞核內m6A結合蛋白,并且對m6A的結合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導m6A調控mRNA的剪接[63, 66],YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進其與mRNA的結合,同時抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結合,使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結合蛋白RBM15和RBM15B招募甲基化酶復合物進行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進XIST介導的X染色體基因轉錄本沉默通路[69]. ... 1 2014 ... id='C30'>YTHDC1是細胞核內m6A結合蛋白,并且對m6A的結合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導m6A調控mRNA的剪接[63, 66],YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進其與mRNA的結合,同時抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結合,使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結合蛋白RBM15和RBM15B招募甲基化酶復合物進行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進XIST介導的X染色體基因轉錄本沉默通路[69]. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細胞核內m6A結合蛋白,并且對m6A的結合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導m6A調控mRNA的剪接[63, 66],YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進其與mRNA的結合,同時抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結合,使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結合蛋白RBM15和RBM15B招募甲基化酶復合物進行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進XIST介導的X染色體基因轉錄本沉默通路[69]. ... 1 2016 ... id='C30'>YTHDC1是細胞核內m6A結合蛋白,并且對m6A的結合能力大于YTHDF2.YTHDC1可以介導m6A調控mRNA的剪接[63, 66],YTHDC1通過與前體mRNA剪接因子SRSF3相互作用促進其與mRNA的結合,同時抑制剪接因子SRSF10與mRNA的結合,使有m6A修飾的外顯子被保留[67, 68].lncRNA XIST (X-inactive specific transcript)可以通過它的結合蛋白RBM15和RBM15B招募甲基化酶復合物進行XIST上m6A的甲基化.m6A招募YTHDC1促進XIST介導的X染色體基因轉錄本沉默通路[69]. ... 1 2011 ... id='C31'>釀酒酵母中確認的Mrb1也是YTH結構域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營養(yǎng)生長的器官里通過抑制減數分裂相關的基因來阻止酵母的生殖生長[71].人們很早就觀察到了這個現象,但不知具體機理.現在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知,Mmi1有可能是通過結合m6A發(fā)揮作用的. ... 1 2006 ... id='C31'>釀酒酵母中確認的Mrb1也是YTH結構域蛋白[44].裂殖酵母中的YTH蛋白是Mmi1[70].它在營養(yǎng)生長的器官里通過抑制減數分裂相關的基因來阻止酵母的生殖生長[71].人們很早就觀察到了這個現象,但不知具體機理.現在人們由Mmi1是YTH家族的一員可以推知,Mmi1有可能是通過結合m6A發(fā)揮作用的. ... 2 2005 ... id='C33'>擬南芥中將YTH結構域命名為ECT (evolutionarily conserved C-terminal region ECT domain)結構域[72].因為在研究擬南芥應對各種外界刺激時的一個關鍵蛋白CIPK1(Calcineurin B-Like-InteractingProtein Kinase1)時發(fā)現了有兩個蛋白與其有特異的相互作用,并且含有一個保守的結構域就是ECT結構域.這兩個蛋白分別為ECT1和ECT2.研究表明ECT1、ECT2通過與CIPK1相互作用,在擬南芥接受外界刺激時將鈣離子信號傳遞到細胞核內,具有重要作用.但是,這其中m6A發(fā)揮的功能還沒有研究. ... ... id='C39'>m6A在細胞應對各種外界刺激時發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會改變YTHDF2在細胞中的定位,由細胞質轉移到細胞核,保護特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化,從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會導致跟刺激相關的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會響應各種刺激,表達水平上升[72].所以可以看出,m6A在細胞應對外界刺激時,發(fā)揮不可忽視的作用. ... 1 2014 ... id='C34'>另外一個與YTH結構域相關的擬南芥中的研究是CPSF30(30 kDa cleavage and polyadenylation specificity factor 30)[73],它是一個定位在細胞核中的蛋白,調控mRNA的3′端的剪接,通過水楊酸通路對擬南芥應對外界刺激具有重要作用.然而CPSF30并不包含YTH結構域,它與包含YTH結構域的70 kDa的CPSF30由同一個基因編輯,卻是不同的剪接體.但是正常的擬南芥中不含YTH結構域的CPSF30這種剪接占到絕大部分.接下來,搞清在什么時刻含有YTH結構域的剪接體成為主要剪接體,以及它將發(fā)揮什么作用,是個重要的工作. ... 1 2015 ... id='C37'>m6A調節(jié)細胞的分化.在老鼠胚胎干細胞(embryonic stem cell,ESCs)中敲除METTL3,會使細胞處于初始多能性狀態(tài),而不向活化多能性狀態(tài)轉化,從而抑制進一步分化.相反,在老鼠另一個更易分化的外胚層干細胞(mouse epiblast stem cells,mEpiSCs)細胞系中,敲除METTL3會導致細胞穩(wěn)定性減弱,使細胞快速分化或者細胞死亡[74]. ... 1 2013 ... id='C38'>m6A調節(jié)細胞的節(jié)律[75].很多跟晝夜節(jié)律相關的基因上都含有m6A,通過敲除細胞中的甲基化酶METTL3,降低m6A的水平會導致真核細胞生物鐘周期變長. ... 1 2015 ... id='C39'>m6A在細胞應對各種外界刺激時發(fā)揮重要作用.一些外界刺激如熱擊會改變YTHDF2在細胞中的定位,由細胞質轉移到細胞核,保護特定基因mRNA 5′UTR區(qū)的m6A不被FTO去甲基化,從而發(fā)生cap-independent translation[76].在擬南芥中敲除MTA和FIP37都會導致跟刺激相關的很多通路基因發(fā)生變化[35, 37].ECT1也會響應各種刺激,表達水平上升[72].所以可以看出,m6A在細胞應對外界刺激時,發(fā)揮不可忽視的作用. ...
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