作者 l Alpharesearcher

編輯 l 細胞房間

本篇為雙抗系列第二篇，不講結(jié)構(gòu)講功能。近期Nature reviews Drug Discovery中關(guān)于雙抗的文章Bispecificantibodies: a mechanistic review of the pipeline，值得細讀幾遍。文中提到obligatedbs Abs協(xié)同效應(yīng)的雙抗概念，所謂協(xié)同就是兩種單抗combi而達不到的效果。今天所講的ROCK技術(shù)平臺就是基于cell-engaging antibodies理念的雙抗，即是這種obligatedbs Abs。

提到cell-engaging antibodies，最為人熟悉的便是已上市的雙特異性抗體Blinatumomab，其同時靶向T細胞表面的CD3以及腫瘤細胞表面的CD19，激活T細胞發(fā)揮細胞毒殺傷作用。Blinatumomab的成功使各種形式雙抗的研究熱火朝天，據(jù)醫(yī)藥局外人在雙抗走失在1986的文章中統(tǒng)計，處于不同階段CD3相關(guān)的雙特異性抗體達到了158個，且靶點高度集中于CD19、EGFR、HER2、BCMA和PSMA。在大同的世界里找大不同，我們發(fā)現(xiàn)臨床在研項目中有一個靶向CD16A的cell-engaging雙抗。

ROCK技術(shù)平臺是Affimed公司的專利技術(shù)平臺，是Redirected Optimized Cell Killing的縮寫，即重定向優(yōu)化細胞殺傷平臺。其核心為通過靶向NK和DC細胞的CD16A抗體，牽引和激活NK/DC細胞對腫瘤細胞發(fā)揮ADCC和ADCP的作用（圖1），其與靶向CD3的雙抗的不同之處，主要在于發(fā)揮腫瘤殺傷功能的效應(yīng)細胞不同，CD3依賴于T細胞（圖2）。

圖1. ROCK技術(shù)平臺示意圖

圖2. BiTE技術(shù)平臺示意圖

CD16A又稱FcγRIII（CD16），抗體可以通過抗原結(jié)合部位識別并結(jié)合腫瘤細胞表面抗原而Fc部位結(jié)合NK等免疫效應(yīng)細胞表面FcγRIII，免疫效應(yīng)細胞得到激活，殺死腫瘤靶細胞，這個過程稱為ADCC。Trastuzumab、Rituximab等單克隆抗體，皆可通過ADCC效應(yīng)發(fā)揮腫瘤殺傷效果。然而基于抗體Fc區(qū)域所介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)也有一些痛點，如抗體的Fc區(qū)域與CD16A的親和力相對較低殺傷效應(yīng)不夠強；另外人的CD16A蛋白有兩種基因型CD16-158V和CD16-158F，兩者與Fc的親和力有所不同，導(dǎo)致不同患者之間具有較大的臨床使用效果差異。ADCC效應(yīng)對于CD16-158F/F純合體以及V/F雜合體的患者使用效果較差。目前在單抗領(lǐng)域，有多種技術(shù)平臺，如去巖藻糖、針對Fc突變，以此提高Fc與CD16A的親和力，介導(dǎo)更強的ADCC效應(yīng)。

ROCK技術(shù)平臺，則提供了一種新的思路，通過特異性的、高親和的、CD16-158V和CD16-158F亞型親和力無差別的CD16A抗體介導(dǎo)ADCC效應(yīng)。如同CD3親和力的設(shè)計是CD3雙抗成功的關(guān)鍵，CD16A抗體結(jié)合位點的選擇以及親和力的設(shè)計對于基于CD16A的雙抗也至關(guān)重要。

Affimed公司通過一系列篩選、進化，所得到的CD16A scFv抗體能夠特異性的結(jié)合CD16A而不與CD16B結(jié)合，其親和力要遠高于普通IgG1亞型抗體以及ADCC增強改造的IgG1亞型抗體，對于CD16-158V和CD16-158F兩種亞型的結(jié)合能力幾乎無差別。另外，CD16A scFv與CD16A的結(jié)合位點，不同于Fc與CD16A的結(jié)合位點，血液中的IgG抗體不會影響其與CD16A結(jié)合阻礙其發(fā)揮功能（圖3）

圖3. CD16A scFv親和力研究

1. 相對于ADCC增強型抗體，體外殺傷效果更好：

AFM24是基于ROCK平臺開發(fā)的EGFR/CD16A雙特異性抗體，體外殺傷實驗表明相比于西妥昔單抗（靶向EGFR抗體）以及改造后ADCC效應(yīng)增強的抗體具有更好的體外殺傷效應(yīng)（圖4）。

圖4. AFM24體外殺傷效應(yīng)

2. 對于腫瘤細胞表面低表達的抗原具有良好的殺傷效果（圖5）

圖5. AFM26對BCMA低表達細胞系殺傷效應(yīng)

對于低表達抗原具有較好的殺傷效果，提醒我們需注意抗原選擇的特異性，以免對正常組織進行攻擊。

3. 相對于T cell engagement，具有更好的安全性（圖6）

細胞因子風(fēng)暴是CD3雙抗較為常見的嚴重副反應(yīng)（與CD3抗體的設(shè)計高度相關(guān)），再生元的雙特異性抗體REGN1979（CD20xCD3）近期因兩名患者發(fā)生細胞因子釋放綜合征導(dǎo)致死亡，而被FDA叫停。AFM26體外實驗顯示，其細胞因子釋放水平遠遠低于BiTE，提示其具有較好的安全性。

圖6. AFM26細胞因子釋放情況

小編總結(jié)

隨著ADCC效應(yīng)在抗體腫瘤治療中的作用得到越來越多的認可，基于單抗的增加ADCC效應(yīng)工程改造日益增多。如小編在之前的文章中ADCC效應(yīng)的證明者—Margetuximab所介紹的Margetuximab抗體。Affimed公司的ROCK雙抗技術(shù)平臺，則為我們提供了另一種ADCC效應(yīng)思路。目前Affimed的雙抗技術(shù)平臺已與羅氏等多個大型制藥公司展開合作。其AFM13（CD30x16A）是該平臺上進展最快的藥物，目前處于phase1/2階段，從早期數(shù)據(jù)看該藥物具有較好的安全性、耐受性以及較高的ORR，臨床后期的數(shù)據(jù)值得期待。

參考文獻

1. Affimed Announces Clinical Data Update on Lead Product Candidate AFM13 in CD30+lymphoma at ICML 2019.

2. Redirectedoptimized cell killing (ROCK?): A highly versatile multispecificfit-for-purpose antibody platform for engaging innate immunity.

3. ADCC效應(yīng)的證明者—Margetuximab. alpharesearcher. 生物制藥小編. 2019-06-28.

4. 雙抗走失在1986. 醫(yī)藥局外人. 生物制藥小編. 2019-06-25.

5. Redirected Optimized Cell Killing: ROCK-A next generation immune cell engager platform.

6. A novel tetravalent bispecific TandAb（CD30/CD16A）efficiently recruits NK cells for the lysis of CD30+ tumor cells.

Bio - Autumn 2019 生物藥早期實驗室篩選發(fā)現(xiàn)研究

與后期工藝研發(fā)探討

由佰傲谷BioValley及藥融圈共同主辦的CMC-Expo China 2019將在9月9日-10日走進蘇州工業(yè)園區(qū)。Bio - Autumn 2019作為本次展會分會，將圍繞實驗室到市場的全流程化考量、創(chuàng)新生物醫(yī)藥的早期開發(fā)、工藝開發(fā)CMC與NDA等主題，為參會嘉賓帶來精彩紛呈的會議內(nèi)容。

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