01 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠,體重200-250克,8周齡。 02 實(shí)驗(yàn)試劑 1)STZ(鏈脲佐菌素)無(wú)色固體2-8℃干燥避光保存,115℃可分解為氣體水溶液不穩(wěn)定,溶于雙蒸水或鹽溶液。但在低溫下pH4-4.5是較為穩(wěn)定。 2)檸檬酸鈉,檸檬酸 用于調(diào)制緩沖溶液。 03 實(shí)驗(yàn)器材 1ml注射器,大鼠固定器。 04 試劑配制 1)檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=4.5.0.1mol/L)配制0.1mol/L檸檬酸鈉溶液,在用檸檬酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至4.5。 2)稱量140mgSTZ溶解于10ml檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液,配制成14mg/mlSTZ溶液。 05 動(dòng)物分組及造模 1)大鼠自由攝食,飲水,動(dòng)物房保持室溫20-25℃,并維持一定的光照。三天后,將大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。 2)所有大鼠實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前12小時(shí)開(kāi)始禁食但不禁水,禁食時(shí)間可根據(jù)情況順延至18小時(shí),但不要超過(guò)24小時(shí)。 3)將配置好的STZ溶液用錫箔紙包裹做避光處理并保存在冰水中,并在配制成功后30分鐘內(nèi)完整注射造模。 4)稱量大鼠體重,采用腹腔注射給藥進(jìn)行造模,劑量為70mg/kg。對(duì)照組注射等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。 06 模型指標(biāo)檢測(cè) 血糖測(cè)定:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中腹腔注射STZ 48小時(shí)和72小時(shí)分段測(cè)定大鼠血糖并記錄,采用剪尾采血法,使用血糖試紙進(jìn)行檢測(cè)。 ※兩次檢測(cè)血糖濃度均高于16.8mmol/ml,即可認(rèn)為造模成功。 07 后期飼養(yǎng) 糖尿病大鼠會(huì)有很明顯的“三多一少”癥狀,所以盡量分籠飼養(yǎng),勤換墊料,并保證足夠的飼料和飲水供給。 01 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD糖尿病大鼠(八周以上大鼠,并糖尿病造模時(shí)間超過(guò)1周并少于2周)普通SD大鼠(八周以上,時(shí)間相近)。 02 實(shí)驗(yàn)試劑 1)水合氯醛(或戊巴比妥鈉)用于麻醉實(shí)驗(yàn)大鼠。 2)醫(yī)用酒精,表層消毒。 3)龍膽紫(或苦味酸,碘酊)創(chuàng)口標(biāo)記染液。 4)試紙,標(biāo)記創(chuàng)口,提前裁成直徑為2cm的小圓片,并浸入標(biāo)記染液中。 03 實(shí)驗(yàn)器械 手術(shù)剪,眼科鑷,剪毛剪,(需提前高溫滅菌)。 04 造模 1)麻醉: 將大鼠稱重并按320mg/kg水合氯醛或40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。 2)創(chuàng)面制作: 1. 將麻醉好的大鼠腹面朝下固定板上,固定四肢,在其背部側(cè)面剪毛備皮,可以偏向背部,避免大鼠抓繞影響實(shí)驗(yàn)。 2. 常規(guī)消毒,用鑷子夾取浸入龍膽紫溶液的直徑2cm的濾紙貼于剪毛區(qū),輕按紙片,使大鼠悲傷印上與紙片大小形狀相同的標(biāo)記區(qū)域。 3. 用剪刀沿標(biāo)記邊緣線剪去標(biāo)志區(qū)表皮。 3)后期飼養(yǎng)觀察:造模后的大鼠單獨(dú)飼養(yǎng),注意更換墊料保持環(huán)境干燥清潔。造模后,每隔兩天,測(cè)量傷口直徑,計(jì)算創(chuàng)面面積,并記錄數(shù)據(jù),繪制愈合速率曲線。 |
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