|
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期 1 實(shí)驗(yàn)方法 1．用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60%-70%，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求處理，繼續(xù)培養(yǎng)； 2．根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞處理后，把細(xì)胞吸出至1.5ml離心管內(nèi)，200g 離心5min； 3．用 PBS 洗滌細(xì)胞2次，200g離心5min，收集1-5×105 細(xì)胞； 4．細(xì)胞固定：加入1ml冰浴預(yù)冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃固定2h或更長(zhǎng)時(shí)間。固定12-24 h可能效果更佳。200g左右離心3-5min，沉淀細(xì)胞。加入約1ml冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。 注意：70%乙醇在使用前需進(jìn)行預(yù)冷處理 5．碘化丙啶染色液的配制：參考下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液： 6．染色：每管細(xì)胞樣品中加入0.5 ml碘化丙啶染色液，緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光溫浴30min。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24h內(nèi)完成流式檢測(cè)。 7．流式檢測(cè)：用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng)488nm波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。 2 結(jié)果示例及分析 圖片解析： ①G1期(gap1)，指從有絲分裂完成到期DNA復(fù)制之前的間隙時(shí)間； ②G2期(gap2)，指DNA復(fù)制完成到有絲分裂開始之前的一段時(shí)間； ③S期(synthesis phase)，指DNA復(fù)制的時(shí)期。 圖中第一個(gè)峰為G1期，第二個(gè)峰為S期，第三個(gè)峰為G2期 |
|
|
