第一節(jié) 結(jié)締組織多色染色法
一、Mallory三色染色法
1. 試劑配制
（1）重鉻酸鉀液 重鉻酸鉀2.5g，醋酸5ml，蒸餾水95ml
（2）苯胺藍桔黃G液 苯胺藍0.5g，桔黃G2g，磷鎢酸1g，蒸餾水100ml
（3）酸性復(fù)紅液 酸性復(fù)紅0.5g，蒸餾水100ml
2.染色步驟
（1）中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
（2）重鉻酸鉀液10min。
（3）蒸餾水沖洗2min，蒸餾水2次。
（4）酸性復(fù)紅液2min，蒸餾稍洗。
（5）苯胺藍液20min，95%乙醇快速分化。
（6）直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
3.結(jié)果
膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍色，軟骨、粘液、淀粉樣變物質(zhì)呈淡藍色，神經(jīng)膠質(zhì)纖維、肌纖維和酸性顆粒呈紅色，髓鞘和紅色呈桔紅色。
4.注意事項
（1）酸性復(fù)紅液易溶解于水，肉眼觀察切片上保留一定的紅色。
（2）苯胺藍液染色后，用95%乙醇分化時，須用顯微鏡觀察掌握。
（3）對陳舊的固定標本，其染色效果較差，可增加染色時間。
（4）另張切片，可同時作膠原纖維對照染色而進行鑒別組織成分。
二、Masson三色染色法
1.試劑配制
（1）Masson復(fù)合染色液 酸性復(fù)紅1g，麗春紅2g，桔黃G2g，0.25%醋酸300ml。
（2）亮綠染色液 高綠SF0.1g，0.2%醋酸100ml。
2.染色步驟
中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
（1）Masson復(fù)合染色液5min。
（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。
（3）5%磷鎢酸5-10min。
（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。
（5）亮綠染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。
（6）無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
3.結(jié)果
膠原纖維呈綠色，肌纖維呈紅色，紅細胞呈桔紅色。
4.注意事項
（1）Masson復(fù)合染色液，經(jīng)磷鎢酸分化時須用顯微鏡控制肌纖維清晰為止。
（2）亮綠染料可用苯胺藍替換，可用來作為對比觀察染色的效果。
三、顯示膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈力纖維的三聯(lián)染色法（1993年）
1.試劑配制
（1）高錳酸鉀硫酸液 0.5%高錳酸鉀水溶液中加入5ml的硫酸。
（2）維多利亞藍染色液 維多利亞藍2g，糊精0.5g，間苯二酚4g，蒸餾水200ml。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約5min。然后用另一容器取30%三氯化鐵水溶液25ml，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中繼續(xù)煮沸3min，不斷攪拌溶液呈膠體狀。去火冷卻過濾，將濾紙上的殘渣連同濾紙放在60℃恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加濃鹽酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
（3）麗春紅染色S染色液 0.5%麗春紅S水溶液15ml，苦味酸飽和水溶液85ml。
（4）Gomori氨性銀改良液 取5%硝酸銀水溶液5ml，滴加濃氨水由棕黑色變清為止，再加入3%氫氧化鈉水溶液5ml，此時該液突變紫黑色，這時再加入氨水使之變清晰為止。最后用蒸餾水補足至50ml，盛棕色試劑瓶中，置于冰箱中備用較長時間。
2.染色步驟
（1）中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
（2）高錳酸鉀硫酸液氧化3min后，自來水浸洗后，用2%草酸漂白2min。
（3）5%硫酸鐵銨1min。
（4）Gomori氨性銀改良液染1min。
（5）蒸餾水洗2次，用15%甲醛液還原1min。
（6）蒸餾水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸餾水洗1次。
（7）70%乙醇浸一次，再浸入維多利亞藍液中染30min-1h。
（8）95%乙醇分化1min左右。
（9）浸入蒸餾水中1min后，用麗春紅S染色液染色2min。
（10）直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
3.結(jié)果
膠原纖維呈紅色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，彈力纖維呈綠色，肌肉和紅細胞呈淡黃色。
4.注意事項
氨性銀液滴染時，要用干凈吸管，防止銀液污染而發(fā)生沉淀。氨性銀液作用后的切片不能傾倒，應(yīng)將蒸餾水沖洗切片上的銀液，這樣就不會使銀液表面揮發(fā)的銀顆粒而沉積在組織上。
第二節(jié) 膠 原 纖 維
一、膠原纖維的分布和組成成分
膠原纖維是結(jié)締組織中的三種纖維之一，分布最為廣泛，含量最多。主要分布于真皮、鍵、韌帶、骨、透明軟骨、動脈、腸壁、子宮和基底膜等，膠麻纖維具有韌性大，抗拉力強的特點。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成膠水，稱白明膠。膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的基本構(gòu)造相似，都以膠原單位(蛋白質(zhì)為主的大分子)為基本單位。膠原單位接連和融合形成網(wǎng)狀纖維;它是粗約1μm左右的分支狀纖維，形成全身組織的支架，在HE染色中看不清楚。但其外面裹著的一層類蛋白，憑借鍍銀法可以清楚地顯示出來，故又稱為嗜銀纖維。
膠原纖維單位主要由纖維母細胞合成。其他如平滑肌細胞等也能產(chǎn)生。膠原單位的形成開始于細胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，合成比構(gòu)成膠原單位的α肽鏈更長的前α肽鏈，經(jīng)高爾基體分泌出細胞，在細胞外液的內(nèi)切肽酶作用下，切去前α肽鏈的附加肽段而形成膠原單位；再經(jīng)細胞外液的賴氨酰氧化酶作用使兩條肽鏈通過醛醇或醛胺縮合構(gòu)成共價交聯(lián)。這樣膠原單位分子之間就形成了穩(wěn)定的聯(lián)系，形成膠原微纖維，然后再聚合而成膠原纖維。
二、膠原纖維染色的應(yīng)用
膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭形、纖維形細胞腫瘤的組織來源：常常要在纖維、平滑肌和神經(jīng)三者之中作出選擇。還能使用于其他的情況下，如觀察動脈硬化的心臟，在HE切片中，心肌內(nèi)散在的小疤痕灶和心肌均被染作紅色，而作膠原纖維染色可將膠原組織和心肌組織明顯地區(qū)分開來。早期肝硬化用膠原纖維染色，也可使小葉之間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來。由干膠原纖維是由成纖維細胞產(chǎn)生的一種纖維蛋白成分，常常被酸性染料染色。
l. Van Gieson苦味酸酸性復(fù)紅法(1889年)
[試劑配制]
(l) Van Gieson液 l%酸性品紅水溶液10ml，苦味酸飽和水溶液(約l.22%)90ml。
(2)Weigert鐵蘇木素溶液 甲液：蘇木素lg,95%或無水乙醇100ml；乙液：29%三氯化鐵水溶液4ml，蒸餾水95ml，鹽酸l ml。
臨用時取甲液和乙液等量混合即可。鐵蘇木素不能像明礬蘇木素一樣配制后放置，因鐵與染色劑的色素可引起化合而形成不溶性沉淀。所以，以鐵作為媒染液時，必須與染液分別配制、分別應(yīng)用或臨時混合應(yīng)用。
[染色方法]
(1)組織固定于10%甲醛液，常規(guī)脫水包埋。
(2)組織切片脫蠟至水。
(3)用Weigert蘇木素液染5~l0min。
(4)自來水沖洗數(shù)分鐘。
(5)根據(jù)染色的深淺可用0.5%鹽酸乙醇分化。
自來水洗至變藍；用蒸餾水洗。
(7)用Van Gieson液染1~5min。
傾去染液，直接用95%乙醇分化和脫水。
(9)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 膠原纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及紅細胞黃色，胞核呈黑色。
[注意事項]
(1)目前以苦味酸、復(fù)紅的Van Gieson染液直接染此一種溶液即可。
(2)Weigert鐵蘇木素分甲、乙兩液，應(yīng)于臨用前將兩液等量混合使用，而不宜預(yù)先混合，否則易氧化沉淀而逐漸失其染色能力。
(3) Van Gieson染色液分別在臨用時混合，防止放置時間長，則酸性品紅不易著色。
2. Siriured染色法
這種方法可使膠原纖維長期保存，是不易褪色的一種好方法。
[試劑配制]
(l)Siriusred 飽和苦味酸液 0.5%Siriured l0ml，苦味酸飽和液90ml。
(2)天青石藍液 天青石藍B1•25g，鐵明礬1.25g，蒸餾水250m1。
溶解煮沸，待冷過濾后，加入甘油30m1，然后再加入濃鹽酸5ml。
[染色方法]
(1)組織固定于10%甲醛液，常規(guī)脫水包埋。
(2)切片脫蠟至水。
(3)入天青石藍液染5~10min，
(4)蒸餾水洗多次。
(5)Siriured飽和苦味酸液染15~30min。
無水乙醇直接分化與脫水。
(7)二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 膠原纖維呈鮮紅色，細胞核綠色，其他為黃色。
3. Lillie改良Van Gieson法(1965年)
[試劑配制]
A. 用1%醋酸配成0.1%快綠FCF 液，或為得到較藍的綠色用3%毛綠S(Wool greenS )。
B. 且0.2%酸性復(fù)紅，0.2%紫胺(Violamine)或用0.1%~0.5%麗春紅S(ponceau S) 溶于飽和的苦味酸水溶液。
[染色方法]
(1)按常規(guī)將切片脫蠟至水。
(2)用Harris明礬蘇木素液染3min。
(3)自來水洗，鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘。
(4)自來水洗至顯藍，蒸餾水洗。
(5)在A溶液中染4min。
在1%醋酸中洗2次。
(7)在B溶液中染l0~l5min。
在1%醋酸中洗2min。
(9)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 結(jié)締組織紅色，肌肉、胞質(zhì)灰綠色，紅細胞綠色，核藍黑色。
4. Clark改良Van Gieson臺盼藍法(1971年)
用于膠原纖維、包括非常細的纖維，以及肌肉角化上皮的染色。
[固定] 甲醛固定液。
[試劑配制]
(l)A液 0.3g萘酚黃S（naphthol yellow S）溶竄犯100mI蒸餾水。
(2)B液 0.2g酸性復(fù)紅溶于100ml蒸餾水中。
(3)C液 0.2g臺盼藍溶于100ml 蒸餾水中。
染色液由40份A溶液，2.5份B溶液和2份C溶液組成。每40分A溶液加入，0.4ml濃鹽酸。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水
(2)在Weigert鐵蘇木素中5ml。
(3)自來水洗。
(4)在染色液中染l0min。
(5)在水中迅速洗一下即經(jīng)過50%、70%與95%乙醇，無水乙醇兩次。
二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 核-藍黑色；胞質(zhì)-黃色，膠原纖維-粗纖維紅色，細纖維藍色。
[說明] 本法中的Weigert鐵蘇素液染色，可改用棓花青-鉻礬溶液中染16 h。
5 . Biebric猩紅染色法 Lillie，1965年
[顯示目的] 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、肌肉、胞質(zhì)。
[固定] 甲醛液，Orth液。
[試劑配制]
(l)A液 Weigert鐵蘇木精，見苦味酸酸性復(fù)紅法。
(2)B液 0.2gBiebrich猩紅溶于100ml1%醋酸。
(3)C液 0.1g苯胺藍溶示100ml飽和苦味酸水溶液。
[染色方法]
(1)常規(guī)脫蠟至水。
(2)在A溶液中染5min。
(3)自來水沖洗。
(4)在B染液中染4min。
(5)自來水洗。
在C染液中染5min。
(7)直接移入1%醋酸中3min。
無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 結(jié)締組織藍色，腎小球基質(zhì)藍色，網(wǎng)狀纖維藍色，紅細胞橙紅至猩紅色，肌肉粉紅色，胞質(zhì)粉紅色至灰色，核黑藍色，粘液淺藍色。
6. 苦味酸氨基黑染色法 L i1lie，1965年
[顯示目的] 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、基膜、腎小球基質(zhì)。
[固定] 任何固定劑均可。
[試劑配制]
(l)A液 煌紫素R(Brilliant purpurin R)0.6g；偶氮復(fù)紅G(azo-fuchsin G)0.4g；冰醋酸1ml，蒸餾水加至100m1，上述兩種染料先各自用1%醋酸配成1%溶液，以6﹕4比例混合后再用。
(2)B液 氨基黑10B，5~100mg；苦味酸飽和水溶液100m1。同樣濃度的苯胺藍或甲基藍均可用來代替氨基黑(又稱蔡酚藍黑)，粘液可得到較好的顯示。
[染色方法]
(1)切片常規(guī)脫蠟至水。
(2)在Weigert鐵蘇素中染6min。
(3)自來水洗。
(4)在A染液中染5min。
(5)流水中洗。
在B染液中染1~5min。
(7)在1%醋酸中分色2min。
無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和基膜深綠色；粘液深綠色，上皮細胞胞質(zhì)棕色，肌肉淺綠色，紅細胞紅色。
7. Petersen 酸性茜藍改良法
[顯示目的] 膠原與網(wǎng)狀組織、骨鉻肌、心肌橫紋、心肌間板。
[固定] Zenker液，Helly液、Bouin液或甲醛液。
[試劑配制]
(1)A液 即緩沖的酸性茜藍溶液。酸性茜藍2B，0.25g；硫酸鋁5g；蒸餾水50m1。煮沸5min。冷卻，過濾，再補足到原來的體積。然后加20ml的Sorensen檸檬酸鹽溶液(檸檬酸晶體21g，lN NaOH，200m1。加蒸餾水至1000ml)和30ml 0.lN鹽酸緩沖到pH為2.25。
(2)B液 即苯胺藍橘黃G溶液。苯胺藍0.5g; 橘黃G，2g；蒸餾水100ml，冰醋酸8ml，煮沸，冷卻，過濾。
[染色方法]
(1)常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)在A液中染3min。
(3)在蒸餾水中快速洗2次。
(4)在5%磷鎢酸液中分色并媒染2~3min。
(5)蒸餾水洗。
在未經(jīng)稀釋的B液中染2~3min。如染色結(jié)果太深，可用1、2或3倍體積的蒸餾水稀釋。
(7)蒸餾水中略洗。
先用95%乙醇后用無水乙醇脫水。
(9)二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 膠原與網(wǎng)狀結(jié)締組織藍色，染色質(zhì)磚紅色，肌組織根據(jù)所用不同品種的固定劑染色從深品紅色至亮橙色，紅細胞橙紅色，粘液淡藍色，神經(jīng)節(jié)細胞淡品紅色，腺細飽根據(jù)其組成從淺藍色至品紅色。
8. 顯示膠原纖維、細胞和肌肉的新染法
[固定]中性甲醛液，石蠟切片。
[試劑配制]
(1)Ponceau's染色液 0.5%Pohceau's(麗春紅S，上海試劑三廠)水溶液l0~15ml，苦味酸飽和水溶液85~90ml。
(2)Victoria blue'B 染色液 Victoria blue'B(維多利亞藍，B，上海試劑三廠) 0.5 g， 70%乙醇100m1。
[染色方法]
(1)組織切片脫蠟至水。
(2)70%乙醇稍洗后，入Victoria blue'B染色液中l(wèi)5min。
(3)95%乙醇中分化數(shù)秒鐘。
(4)用蒸餾水洗2次。
(5)用Ponceau's染色液滴染2min。
直接用無水乙醇分化與脫水。
(7)二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果]膠原纖維呈鮮紅色，細胞核和血細胞呈綠色，肌肉呈黃色。
。
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作者: appo 發(fā)布日期: 2005-12-12

第三節(jié) 網(wǎng)狀纖維
網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維。它由網(wǎng)狀細胞所產(chǎn)生。網(wǎng)狀細胞是一種星狀多突的細胞，核大，著色較淺，核仁明顯，胞質(zhì)較豐富，胞突彼此連接形成細胞網(wǎng)架。網(wǎng)狀纖維纖細而有分支，穿行于細胞體和突之間，共同構(gòu)成網(wǎng)狀支架。這種纖維用HE染色一般不易辨識。若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，如又稱為嗜銀纖維。
網(wǎng)狀纖維纖細，直徑約0.2-1um，沒有彈性，而有韌性，能抵抗胃液的消化和弱酸的腐蝕。
一、網(wǎng)狀纖維染色的應(yīng)用
1.用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來源
（1）顯示和區(qū)分癌和肉瘤
（2）顯示和區(qū)分血管內(nèi)皮瘤與血管外皮瘤
（3）用以鑒別淋巴細胞肉瘤與網(wǎng)狀細胞肉瘤
（4）區(qū)分骨尤文氏肉瘤與骨網(wǎng)狀細胞肉瘤
（5）顯示與鑒別骨異質(zhì)增生與骨化性纖維瘤
（6）區(qū)分軟骨粘液纖維瘤與粘液肉瘤
（7）鑒別腦膜瘤與星形細胞瘤
2.用于某些腫瘤的診斷
（1）平滑肌肉瘤
（2）纖維肉瘤
（3）滑膜肉瘤
（4）惡性神經(jīng)鞘瘤
3.用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)展及其惡性程度。
4.顯示與觀察基底膜的變化。
5.用于識別壞死組織的結(jié)構(gòu)及類型
（1）凝固性壞死
（2）肺結(jié)核干酪樣壞死
6.用于顯示和研究肝組織病變。
二、網(wǎng)狀纖維染色的原理
1. 氧化
2. 感應(yīng)
3. 浸銀
4. 還原
三、網(wǎng)狀纖維染色方法
1.Wider染色法
（1）固定 甲醛液或其他固定液
（2）試劑配制 氧化銀溶液：40%氫氧化鈉 1滴半
10%硝酸銀 2.5ml
取40%氫氧化鈉滴入10%硝酸銀溶液中立即產(chǎn)生棕褐色沉淀，逐次滴入28%氨水恰好溶化沉淀（一般3滴為宜），用蒸餾水補足20ml。
（3）染色次序
1）組織切片脫蠟至水。
2）10%磷鉬酸，2-5min。
3）蒸餾水沖洗，5min。
4）1%硝酸鈾，5s。
5）蒸餾水沖洗，10s。
6）氧化銀溶液，5-10min。
7）95%酒精速洗，1-2s。
8）還原液還原，1-2s。
9）蒸餾水沖洗，2min。
10）0.2%氯化金調(diào)色，2-20s。
11）蒸餾水沖洗，5min。
12）5%次亞硫酸鈉，2min。
13）蒸餾水沖洗，2min。
14）核固紅染細胞核，5-10min。
15）水稍洗。
16）常規(guī)無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
（4）染色結(jié)果
網(wǎng)狀纖維呈黑色、細胞核呈紅色。
第四節(jié) 彈 力 纖 維
一、彈力纖維的形態(tài)特點和組成成分
彈力纖維由糖蛋白構(gòu)成，富含親水性的極性氨基酸。彈性蛋白提供彈力纖維的彈性，它是一種不溶性蛋白質(zhì)，當(dāng)用弱堿處理纖維結(jié)締組織時，其仍然存在。三分之一為甘氨酸，11% 為脯氨酸。與膠原纖維不同處為其氨基酸組成中約95%屬于非極性疏水氨基酸，鎖鏈賴氨酸(Desmosine)和異鎖鏈賴氨素(lsodesmosine)是彈性蛋白所特有，它們起著共價交聯(lián)的作用。
近年來，電鏡下看到組織培養(yǎng)的平滑肌細胞可以合成彈力纖維的兩種成分。在沒有平滑肌細胞存在時，可能由纖維母細胞形成。彈力纖維廣泛分布于身體各處，特別是在皮膚、血管、壁、韌帶、氣管、支氣管、肺泡、耳廓和腺體的導(dǎo)管處等最為豐富。彈力纖維由兩種成分組成，即集合束的彈力微纖維(由糖蛋白形成)和均質(zhì)狀的彈力蛋白。
彈力纖維在常規(guī)染色中難以區(qū)別于其他纖維，只有用特殊染色方法，才能清晰地顯示出來。近來學(xué)者研究認為，彈力纖維系統(tǒng)是由彈力纖維、前彈力纖維和耐酸纖維等三種纖維構(gòu)成，這三種纖維的分布、走行和組織化學(xué)均不相同。耐酸纖維用一般的彈力纖維染色法其著色很淡，前彈力纖維著色也不夠深，但如經(jīng)強氧化后醛品紅或間苯二酚品紅法則可把彈力纖維系統(tǒng)中的三種纖維同時顯示出來。
二、彈力纖維染色的應(yīng)用
(一)顯示皮膚組織中彈刀纖維的變化 在皮膚組織病變中，特別是真皮內(nèi)的彈力纖維， 時常發(fā)生改變，出現(xiàn)增生、卷曲、變性、崩解等，做彈力纖維形成聚集成堆的束狀、團塊狀及不規(guī)則狀。見于以下病變①彈力纖維??；②彈力纖維增多癥；③彈力過度性皮膚；④皮膚疏松；⑤皮膚環(huán)狀肉芽腫；⑥肢端角化的彈力纖維變性；⑦硬皮病。
(二)顯示與判定心血管疾病 彈力纖維是心臟和血管的主要成公之一。
(1)顯示及鑒別心內(nèi)膜彈力纖維增生癥與心內(nèi)膜心肌纖維化。這兩種病變時心內(nèi)膜中的彈力纖維和膠原纖維會出現(xiàn)異常增多，在HE-染色中兩者的病理變化甚為相似。因此，需要特殊染色加以顯示與鑒別。
(2)顯示動脈粥樣硬化時硬化斑塊底部的內(nèi)彈力板崩解，斷裂乃至消失情況。
(3)顯示與觀察梅毒性主動脈炎時動脈中層彈力纖維發(fā)生灶性破壞的程度。
(4)顯示高血壓時小動脈彈力纖維顯著增生以及形成多層的病變特點。
(5)用于無脈癥，顯示在大動脈血管申層彈力纖維密集排 列，彈力層增厚。
顯示老年人動脈變性：動脈的彈力板變性、增厚、斷裂、崩解等現(xiàn)象。
（三）視察某些病變中的彈刀纖維是否增生與破壞 如慢性支氣管炎、肺氣腫、原發(fā)性或繼發(fā)性腎固縮等，均可導(dǎo)致彈力纖維縱行。散亂、斷裂、破壞和增生，形成碎片或顆粒。
(四)顯示與鑒別腫瘤組織
(1)彈力纖維瘤 在彈力纖維瘤體的纖維組織中，有許多球狀或顆粒狀變化的彈力纖維。在HE染色中容易忽略，但用彈力纖維染色，能清晰見到瘤體內(nèi)豐富的彈力纖維球。
(2)乳腺癌 見于導(dǎo)管和血管壁周圍，這種現(xiàn)象多合并在硬癌和浸潤性小葉癌上。如彈力纖維染色法證明在導(dǎo)管癌上，伴隨出現(xiàn)彈力纖維增生，可證明是早期浸潤癌。
三、各種染色方法
l、Verhoeff鐵蘇木素染色法 媒染劑三氯化鐵和碘配成的蘇木素染色液，即Verhoeff鐵碘蘇木素對彈力纖維有染色力，但沒有選擇性，它既可染彈力纖維，也可染細胞核和膠原纖維等。通過“染料的分散度和組織的結(jié)構(gòu)密度”以達到分辨不同組織的目的。如彈力纖維和細胞核的結(jié)構(gòu)密度都是比較致密的，鐵蘇木素染液的粒子比較容易地分散到狹孔的彈力纖維或細胞核的間隙中，蘇木素粒子在狹孔的彈力纖維中比較密集，所以染色也比較深；而分散到寬孔的膠原纖維間隙中較稀疏，所似染色也比較淺。
[固定] 105甲醛溶液或其他固定液。
[試劑配制] 鐵碘蘇木素液：先將蘇本素1g，無水乙醇20ml，進行加溫溶解后加入10%三氯化鐵水溶液8m1，最后再加入Lugol碘液8ml即可（Lugol液：碘化鉀2g，碘結(jié)晶lg，蒸餾水100ml）。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)鐵碘蘇木素液染15~30min，至顏色呈深黑色。自來水洗。
(3)2%三氯化鐵水溶液分化10~20s，至彈力纖維清晰為止。如果分化過度，可再返回第2步重染鐵碘蘇木素液。
(4)充分水洗。
(5)用95%乙醇去碘2~Smin，使黑色纖維更為清晰。
水洗，VG復(fù)染5min。
(7)95%乙醇急速分化。
無水乙醇脫水，二甲苯透明，申性樹膠封固。
[結(jié)果]彈力纖維黑色或黑藍色，胞核黑色，校原纖維呈紅色。
2、Weigert間苯二酚復(fù)紅染色法 三苯甲烷系堿性染料與雷鎖辛和三氯化鐵組成一種帶有弱正電荷的染料，與結(jié)構(gòu)致密的、富于內(nèi)表面的彈性纖維通過非極性吸著而完成染色。非極性吸著，是染料不具有強電荷時和組織成分間的結(jié)合。就是說雷鎖辛復(fù)紅液對彈力纖維的染色。間苯二酚復(fù)紅液實際上是由堿性品紅的鐵間苯二酚色淀（Lake)形成的一種復(fù)合物，這種復(fù)合物與彈力纖維結(jié)合，并使彈力纖維著色。其結(jié)合的原理不清楚，可能是彈力纖維某些部分與間苯二酚的基團形成氫鍵。
[固定] 10%甲醛液及其他固定液。
[試劑配制] 間苯二酚復(fù)紅液：堿佳品紅1g，間苯二酚2g，蒸餾水200m1，30%三氯化鐵1.25ml，濃鹽酸2ml。
取一個300ml燒杯，放入堿性品紅、間苯二酚和蒸餾水，用玻璃棒攪拌，加熱煮沸。再慢慢加入30%三氯化鐵液，在攪拌下繼續(xù)煮沸3~5min。冷卻后過濾，傾去濾液。將濾紙和沉淀物一同放入燒杯內(nèi)，置于干燥箱內(nèi)烘干。取出后加入95%乙醇100ml，在水鍋內(nèi)加熱，并不斷攪拌至沉淀物完全溶解，取出濾紙，冷卻后過濾。補足因蒸發(fā)失去的乙醇至100ml。最后加濃鹽酸2ml，混合后即可使用。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)在95%乙醇液中浸2min。
(3)間苯二酚復(fù)紅液染1~2h。
(4)用95%乙醇液洗去多余染液。如果染色較深可用0.2%鹽酸乙醇分化。
(5)自來水沖洗2min。
用VanGieson液復(fù)染lmin。
(7)95%乙醇急速分化。
無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維深藍黑色，膠原纖維紅色，背景黃色。
3、Hart改良間苯二酚復(fù)紅染色法 此法由Weigert法經(jīng)過改良后發(fā)展而來。特點是將Weigert染液用1%鹽酸乙醇溶液配制成稀釋溶液，進行過夜染色，可顯示出較細的彈力纖維。
[固定] 甲醛固定液和其他固定液。
[試劑配制]
(1)酸性高錳酸鉀水溶液 0.5%高錳鉀水溶液50m1，3%硫酸水溶液2.5m1。此液分別配制，臨用時按比例混合使用。
(2)Weigert稀釋液 Weigert原液l0ml，1%鹽酸乙醇溶液90ml。此液可保留一定時間。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)酸性高錳酸鉀水溶液氧化5min。
(3)自來水洗2~3min。
(4)用1%草酸水溶液漂白至無色。
(5)充分水洗2min。
用70%乙醇液略洗。
(7)直接用Weigert稀釋液浸染過夜。
用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘或直接入95%乙醇液中稍分化。
(9)充分水洗5~l0min。
(l0)用Van Gieson液、1%中性紅或HE進行對比染色。
(11)95財乙醇及無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈藍黑色，其他組織呈復(fù)染的顏色。
4、Gomori醛復(fù)紅染色法 醛復(fù)紅染色液是Gomori在Schiff試劑的使用和實驗期間偶然發(fā)現(xiàn)的。醛復(fù)紅是堿性品紅加入三聚乙醛和鹽酸配制而成，作為一種酸性催化劑，可使三聚乙醛逐漸解聚產(chǎn)生乙醛。乙醛有較高的活性，釋出后與堿性品紅染料外露的氨基起反應(yīng)而產(chǎn)生偶氮甲堿，這時顏色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钭仙?，是謂成熟，稱為醛復(fù)紅染液。這秧成熟的醛復(fù)紅對特殊的蛋白質(zhì)及含硫酸根的粘多糖具有很強的親合力，和彈力纖維結(jié)合很緊。另外，對肥大細胞顆粒、脂褐素、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、胃主細胞、胰島的ß細胞和腦垂體的嗜堿細胞，也能很好著色。
[固定] 各種固定液，但以甲醛生理鹽水液固定的染色效果最佳。
[試劑配制]
(1)醛復(fù)紅染液 堿性復(fù)紅0.5g，濃鹽酸1m1，70%乙醇100ml，三聚乙醛1m1。將堿性復(fù)紅溶于70%乙醇，然后加入濃鹽酸和三聚乙醛，輕輕搖動使混合均勻，于室溫下靜置1~2日，待變?yōu)樽仙礊槌墒臁＿^濾于小口砂塞瓶，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br>(2)橘黃G染色液 橘黃G2g，蒸餾水100m1，磷鎢酸5g。
[染色方法]
(1)切片脫蠟至水。
(2)用Lugol碘液處理5min。
(3)稍水洗。
(4)5%硫代硫酸鈉液處理5min。
(5)流水沖洗5min。
70%乙醇稍洗。
(7)入醛復(fù)紅液l0min。
70%乙醇浸洗2次，每次約30s，至切片不再脫色為止。
(9)稍水洗。
(10) 橘黃G液滴染約1s。
(11)蒸餾水洗1~2min。
(12)95%乙醇無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈深紫色，其他為復(fù)染色。
[說明]還可用淡綠橘黃G液、Masson三色液、Van Gieson液等復(fù)染，但不宜過深。
5、Pinkus酸性地衣紅-姬姆薩染色法
[固定] 10%甲醛液、Helly液或Zenker液均可。
[試劑配制]
(1)地衣紅染色液 地衣紅1g，70%乙醇100m1，濃鹽酸0.6m1。地衣紅溶于乙醇內(nèi)然后再加入濃鹽酸。
(2)姬姆薩液 取姬姆薩原液5滴，加蒸餾水100ml。
(3)伊紅乙醇液 伊紅Y59，95%乙醇100m1，混合后不停攪拌。溶解后即可使用。
[染色方法]
(1)切片脫蠟至水。
(2)經(jīng)70%乙醇漂洗。
(3)地衣紅液染30~60min。
(4)95%乙醇分化，洗去多余染液。
(5)用1%鹽酸乙醇處理2~5min，直至背景無色為止。需鏡下控制。
流水沖洗5~l0min。
(7)姬姆薩稀釋液浸染2h~過夜。
用95%乙醇分化，伊紅乙醇液(95%乙醇中滴數(shù)滴)中染色，直到大量的藍色從結(jié)締組織中脫掉為止?？稍阽R下控制。
(9)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果) 細胞核深藍色，彈力纖維深棕到黑色，膠原纖維粉紅到淺藍色，黑色素呈綠色到棕色，嗜伊紅顆粒呈紅色至紫色，細胞核呈深藍色。
6、Uana地衣紅染色法
[固定] 甲醛液或其他固定液。
[試劑配制] Uana地衣紅染色液：地衣紅lg , 70%乙醇99ml，濃鹽酸1m1。將地衣紅溶于乙醇內(nèi)，然后加入濃鹽酸。放置冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>[染色方法]
(1)組織切片，脫蠟至水。
(2)在70%乙醇中2min。
(3)置Uana地衣染色液中15~30min(系溫箱內(nèi)所需時間，室溫中浸染過夜)。
(4)70%乙醇液分化至無多余染液脫下為止。
(5)可用Van Gieson液復(fù)染。
95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈棕紅色至暗棕色，其他組織呈復(fù)染的顏色。
7、Gomori改良醛復(fù)紅-阿爾辛籃染色法
[固定] 各種固定液，但以乙醇或Bouin固定液固定效果最佳。
[試劑配制] 醛復(fù)紅-阿爾辛藍染液：鹽基性復(fù)紅0.5g，阿爾辛藍0.6g，70%乙醇98m1，濃鹽酸1ml，三聚乙醛1m1。將復(fù)紅和阿爾辛藍依次溶于乙醇內(nèi)，然后加入鹽酸和三聚乙醛，充分混合搖勻，放置室溫中24h，使其自然成熟后即可使用。該液用后須貯存于冰箱中可保存2~3個月。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)用醛復(fù)紅-阿爾辛藍液染1~2h。
(3)70%乙醇液漂洗2次，約3~5min。
(4)蒸餾水稍洗。
(5)用焰紅B液染色10~l5min。
直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈深紫色，背景呈藍綠色或其他復(fù)染的顏色。
8、Darrow合成地衣紅改良法(1952年)
[固定] Zenker液、Bouin液、10%甲醛均可。
[試劑配制]
(1)A液 0.4g合成地衣紅溶于100m1含有1%濃鹽酸的70%乙醇中。
(2)B液 即Mallory硼砂亞甲藍液，其貯存原液為1g亞甲藍與1g硼砂溶于100m1蒸餾水中。用時將此原液l ml加蒸餾水至9 ml即可。
[染色方法]
(1)按常規(guī)將切片脫蠟。
(2)在A液中染30min。
(3)在70%乙醇中稍洗2次。
(4)蒸餾水中洗2次。
(5)在稀釋的B液中染5min。
蒸餾水洗。
(7)在含有0.5%透明松香(Colophony，rosin)的95%乙醇中分色并脫水2min。切片要經(jīng)常搖動，在鏡檢下掌握染色結(jié)果。
在無水乙醇中快速完成脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈深紫色或紅紫色，核藍色。
9、Fraenkel多色染色法(Lillie，1965年)
[顯示目的] 彈性硬蛋白、膠原纖維、肌肉和核。
[固定] 任何固定劑。
[試劑配制]
A溶液：地衣紅1.5g，95%乙醇120ml，蒸餾水60ml，硝酸6 mI。向含有3%HCl的70%乙醇加入足量的上述貯存液，使溶液呈棕色。
B溶液，在飽和的苦味酸水溶液中溶以0.25%的靛姻脂紅(Indigo carmine)。
C溶液，即Orth鋰煙脂紅染色液。將2.5~5g煙脂紅溶于飽和碳酸鋰水溶液中(約1.25%)，煮沸10~15min，冷卻過濾并加lg百里蠶粉。
[染色方法]
(1)按常規(guī)切片脫蠟至水。
（2）用C液染2~5min，使核雖紅色。
(3)在1%，鹽酸乙醇中分色。
(4)在A液中染24h。
(5)在80%乙醇中分色。
在B液中染10~l5min。
(7)在3.5%醋酸中洗。
在95%與100%乙醇中快速脫水。
(9)二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果]核紅色，彈性硬蛋白深棕色，膠原纖維藍綠色，肌肉黃色。
10、堿性藍B染色法
[固定] 10%甲醛液、乙醇液或Zenker液均可。
[試劑配制]
(1)堿性藍B乙醇溶液 堿性藍B 0.6~0.8g，70%乙醇100ml。
(2)氫氧化鉀乙醇液 氫氧化鉀0.05g，70%乙醇100ml。
[染色方法]
(1)石蠟切片，脫蠟至水。
(2)在70%乙醇中l(wèi)min，入堿性藍B乙醇液5~10min。
(3)蒸餾水速洗。
(4)用4%鐵明礬溶液處理2~3min。
(5)蒸餾水速洗。
入50%乙醇內(nèi)1~2min。
(7)用0.05%氫氧化鉀乙醇液分化3~5s。
蒸餾水速洗2次。
(9)用0.5%熒光桃紅液染3~5min。
(10)蒸餾水略洗。
(11)用95%乙醇及無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈藍色，膠原纖維及背景呈紅色，紅細胞呈紫紅色。
11、顯示彈力纖維的VBM染色法
[固定] 中性甲醛固定，石蠟包埋切片。
[試劑配制]
(l)Martius yellow染色液 馬休黃0.5g，95%乙醇98m1，磷鎢酸0.5g。
(2)Victoria blue染色液 詳見顯示彈力、膠原纖維的雙重組合染色法。
[染色方法]
(1)組織切片脫蠟至水。
(2)切片入70%乙醇中洗2min。
(3)將切片浸入Victoria blue染色中2h。
(4)用95%乙醇分化l min。
(5)浸入蒸餾水中洗2次。
用馬休黃染色液染l min。
(7)快速用無水乙醇沖洗2次。
二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈藍色，背景黃色。
12.顯示彈力、膠原纖維的雙重組合染色法(1992年)
[固定] 中性甲醛液，石蠟包埋切片。
[試劑配制]
(1)維多利亞藍染色液 維多利亞藍(Victoria blue)2g，糊精0.5g，間苯二酚4g，蒸餾水200m1。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約5min。然后用另一容器取30%三氯化鐵水溶液25ml，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中，繼續(xù)煮沸3min，不斷攪拌溶液呈膠體狀。去火冷卻過濾，將濾紙上的殘渣連同濾紙一起放在60℃恒溫箱中烤干。殘渣呈深藍色細顆粒狀粉末，再將其溶于400m1的70%乙醇液中。然后加濃鹽酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。
(2)麗春紅S染色液 0.5%麗春紅(ponceau's-上海試劑三廠出品)l5ml，加苦味酸飽和水溶液(1.22%)85m1。
[染色方法]
(1)組織切片脫蠟至水。
(2)切片入70%乙醇中洗2min。
(3)將切片浸入盛有維多利亞藍液中染0.5~2h。
(4)直接入95%乙醇中分色數(shù)秒鐘。
(5)用蒸餾水洗2min。
用麗春紅S液滴染切片2min。
(7)直接用無水乙醇沖洗多余染色液2次。
將切片在空氣申或冷風(fēng)干燥。
(9)二甲苯透明，中性樹膠封固。
[結(jié)果] 彈力纖維呈藍綠色，膠原纖維呈紅色，背景呈淡黃色